Créditos ECTS Créditos ECTS: 3
Horas ECTS Criterios/Memorias Trabajo del Alumno/a ECTS: 45 Horas de Tutorías: Clase Expositiva: Clase Interactiva: 30 Total: 75
Lenguas de uso Castellano, Gallego
Tipo: Materia Ordinaria Máster RD 1393/2007 - 822/2021
Centro Facultad de Biología
Convocatoria: Segundo semestre
Docencia: Con docencia
Matrícula: Matriculable | 1ro curso (Si)
Los objetivos están relacionados con la adquisición de los fundamentos teóricos y prácticos de aquellas técnicas que son ampliamente utilizadas en neurobiología para estudiar citoarquitectura, circuitos neuronales, neuroquímica y expresión de genes.
a) El alumno debe adquirir las habilidades necesarias para realizar procesos de fijación e inclusión para microscopía óptica y electrónica, así como manejar distintos tipos de microtomos y sus aplicaciones, protocolos básicos de técnicas inmunohistoquímicas y de hibridación in situ, así como aplicación de trazadores sobre animales de experimentación. También conocer los fundamentos y aplicaciones de los distintos tipos de microscopios ópticos y electrónicos, así como del microscopio láser confocal.
b) El alumno debe alcanzar un nivel de conocimiento de las técnicas que realiza para ser capaz de aplicarlas de manera crítica.
b) El alumno debe ser capaz de evaluar y resolver problemas científicos teóricos y reales usando los conocimientos adquiridos durante la realización de los experimentos.
PROGRAMA DE CLASES PRÁCTICAS
Práctica 1. Fijación e inclusión del tejido nervioso.
Fundamentos. Fijación química: Tipos de fijadores, métodos de fijación, criterios de elección de fijadores. Inclusión: Medios de inclusión para microscopía óptica y electrónica.
Fijación e inclusión de muestras de tejido nervioso para microscopía óptica y electrónica usando distintos fijadores y medios de inclusión según la técnica que se vaya a realizar.
Práctica 2. Microtomía.
Fundamentos. Introducción a la obtención de secciones de tejido nervioso. Tipos de microtomos.
Obtención de secciones a partir de material incluido y no incluido según la técnica que se pretenda realizar.
Práctica 3. Métodos generales de tinción y observación del tejido nervioso.
Fundamentos. Técnicas de tinción generales para la observación del tejido nervioso. Tipos y aplicaciones. Tinciones histoquímicas.
Tinciones. Tinción de Nissl. Método de Golgi. Tinción histoquímica para la sintasa del óxido nítrico.
Práctica 4. Técnicas inmunohistoquímicas: microscopía óptica y electrónica.
Fundamentos. Principios básicos y aplicaciones. Inmunohistoquímica indirecta para microscopía óptica y para microscopía de fluorescencia, y en pre-inclusión y post-inclusión para microscopía electrónica.
Detección de proteínas marcadores gliales y neuronales para su observación en microscopía óptica, de fluorescencia y electrónica en pre-inclusión.
Práctica 5. Detección de vías neuronales con trazadores.
Fundamentos. Tipos de trazadores, técnicas de aplicación, experimentos in vivo y in vitro.
Marcaje en encéfalo utilizando como trazador HRP o BDA y marcajes con trazadores fluorescentes (FDA y TRDA) en médula espinal.
Práctica 6. Hibridación in situ.
Fundamentos. Tipos de sondas. Obtención y marcaje de sondas. Hibridación in toto y en secciones.
Detección de la expresión de un gen en un cerebro in toto.
Práctica 7. Análisis de los resultados.
Observación, interpretación, toma de imágenes y presentación de resultados.
Armengol, J.A., Miñano, F.J. 1995. Bases Experimentales para el Estudio del Sistema Nervioso. Vol. 1. Universidad de Sevilla. Sevilla.
Bancroft, J.D., Gamble, M. 2007. Theory and Practice of Histological Techniques (6ª ed). Churchill Livingstone. London.
Bolam, J.P. 1992. Experimental Neuroanatomy: A Practical Approach. Oxford University Press. Oxford.
Carter, M., Shieh, J.C. 2009. Guide to Research Techniques in Neuroscience. Academic Press. Amsterdam.
Celis, J., Carter, N., Simons, K., Small, J., Hunter, T., Shotton, D. 2006. Cell Biology: A Laboratory Handbook. (3ª ed). Academic Press. London.
Cuello, A.C. 1993. Immunohistochemistry II. John Wiley & Sons. New York.
Gerfen, Ch.R., Rogawski, M.A., Sibley, D.R., Skolnick, P., Wray, S. 2007. Short Protocols in Neuroscience: Cellular and Molecular Methods. John Wiley & Sons, Inc. New Jersey.
Hayat, M.A. 2000. Principles and Techniques of Electron Microscopy: Biological Applications (4ª ed). Cambridge University Press. Cambridge.
Kiernan, J.A. 2008. Histological and Histochemical Methods: Theory and Practice. (4ª ed). Scion Publishing Ltd. Oxford.
Morel, G., Caballero, T.G., Cavalier, A. Gallego, R. 2000. Hibridación in situ en Microscopía Óptica. Universidad de Santiago de Compostela.
Spacek J. 1989. Dynamics of the Golgi method: a time-lapse study of the early stages of impregnation in single sections. Journal of Neurocytology, 18: 27-38.
Záborsky, L., Wouterlood, F.G., Lanciego, J.L. 2006. Neuroanatomical Tract-Tracing 3. Molecules, Neurons, and Systems. Springer Science + Business Media. New York.
En este curso el alumno hará:
- Preparará fijadores e incluirá muestras para microscopía óptica y electrónica.
- Utilizará distintos tipos de microtomos y conocerá sus aplicaciones.
- Realizará técnicas inmunohistoquímicas y de hibridación in situ.
- Realizará experimentos con trazadores neuronales.
- Utilizará distintos tipos de microscopios ópticos y electrónicos.
- Realizará una memoria escrita y gráfica del desarrollo y de los resultados de los experimentos llevados a cabo.
- Analizará y discutirá el uso de técnicas relacionadas con las realizadas durante el curso utilizadas en publicaciones científicas.
Al finalizar el curso el alumno será capaz de:
- Diseñar un protocolo experimental para el estudio del sistema nervioso.
- Procesar material histológico para su observación.
- Seleccionar técnicas apropiadas según las necesidades.
- Manejar los aparatos elementales utilizados en neuroanatomía.
- Analizar y sintetizar resultados.
- Resolver problemas técnicos y adaptación de protocolos técnicos a su material experimental.
- Aplicar contenidos teóricos a casos prácticos.
- Presentar adecuadamente los resultados obtenidos
Clases interactivas: Seminarios o prácticas
Asistencia obligatoria.
- Seguimiento del alumno durante el desarrollo del curso (10% de la nota final).
- Evaluación de la capacidad para diseñar protocolos experimentales (Prueba escrita; 30% de la nota final).
- Evaluación de la memoria de prácticas (30% de la nota final).
- Análisis y discusión crítica de técnicas utilizadas en publicaciones científicas relacionadas con el curso (Un artículo por alumno; 30% de la nota final).
- El aprobado está en 5 sobre 10.
Clases interactivas: Seminarios o prácticas: 30 horas
Elaboración de memorias de prácticas, trabajos: 24 horas
En este curso se realizan técnicas ampliamente utilizadas en neurobiología para poner de manifiesto: citoarquitectura normal, neuroquímica, circuitos neuronales y expresión de genes. Son aconsejables conocimientos básicos del manejo de microscopios y material común de laboratorio: micropipetas, balanzas, etcétera. De cualquier modo, el desarrollo de los experimentos aportará la destreza suficiente para desenvolverse con soltura en el laboratorio.